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生命科学研究
2016年 20卷 3期
刊出日期：2016-06-30
研究论文
研究进展与综述
研究论文
189
胡晓星, 彭 杰, 冯 悦, 刘 丽, 张阿梅, 夏雪山
以主要流行EV71 VP1基因高度保守区为靶点的TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
摘 要：在我国，肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71) C4型是引起手足口病的主要流行基因型。为建立EV71 C4型TaqMan荧光定量PCR检测方法, 在C4型EV71 VP1基因的高保守区, 设计合成引物和TaqMan探针, 将包含此目的区段的基因片段克隆到pcDNA3.1+载体中, 通过体外转录获得标准品, 并以梯度稀释的标准品为模板建立工作曲线, 进而在优化反应条件的基础上建立TaqMan荧光实时定量PCR检测方法。实验中, 所设计引物、探针的高度保守性保证了C4型EV71的高效扩增。经反应条件优化, 引物和探针的最佳工作浓度分别为300 nmol/L和200 nmol/L, 在1×103~1×109 拷贝数检测范围内具有良好的线性关系(R2=1), 灵敏度可达到102 copies/μL。通过对该方法进行检验发现, 批间和组间重复实验的变异系数均小于0.5%, 且该方法对柯萨奇A16 (coxsackievirus A16, CA16)、柯萨奇B1(coxsackievirus B1, CB1)、人轮状病毒(human rotavirus, HRV)、单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2, HSV-2)均无交叉反应, 对6份EV71阳性样本检出率为100%。以上数据表明, 文中建立的TaqMan荧光定量PCR方法可为我国主要流行C4型EV71感染的快速诊断及疾病监控提供有效途径。
2016 Vol. 20 (3): 189-195 [
摘要
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196
陶 怀, 张亦雅, 陈 夏, 何迎春, 梁宋平
敬钊毒素-Ⅲ对Nav1.8通道的抑制作用
摘 要：敬钊毒素-Ⅲ(Jingzhaotoxin-Ⅲ, JZTX-Ⅲ)是从敬钊缨毛蛛毒液中分离到的一种门控调节型毒素, 能选择性抑制钠通道亚型Nav1.5激活, 但对其他6种钠通道亚型(Nav1.1~Nav1.4、Nav1.6和Nav1.7)无抑制作用。为了更好地研究钠通道结构与功能之间的关系, 采用全细胞膜片钳技术检测了JZTX-Ⅲ对表达在ND7/23细胞上的Nav1.8通道的影响。结果显示, JZTX-Ⅲ抑制Nav1.8电流, 并且这种抑制作用具有时间和浓度依赖性, 抑制时间常数和IC50值分别为41.15 ± 0.6 s和1.4 ± 0.23 μmol/L; 1 μmol/L JZTX-Ⅲ使Nav1.8通道的电流-电压关系曲线和激活曲线分别向去极化方向漂移10 mV和9 mV, 使Nav1.8通道的稳态失活曲线向超极化方向漂移16 mV, 明显改变Nav1.8通道的激活和稳态失活动力学。此外, 钠通道序列比对结果提示JZTX-Ⅲ可能通过结合Nav1.8通道DIIS3~S4 连接环上的Lys(K)残基抑制Nav1.8通道。以上研究结果为进一步探索钠通道结构与功能之间的关系奠定了基础。
2016 Vol. 20 (3): 196-201 [
摘要
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202
刘智勇, 上官聪, 吴道兵, 刘晓雯, 赵 婷, 李 丹
FBXO39基因对肿瘤细胞代谢分子的影响
摘 要：FBXO39是F-box蛋白家族中的一员, 研究表明该蛋白是一个新的候选肿瘤-睾丸抗原, 可能与人类肿瘤的发生密切相关。为了探讨FBXO39基因的生物学功能, 实验中首先检测了FBXO39在不同肿瘤细胞系中的表达水平, 并通过分子克隆技术构建了FBXO39的真核表达载体, 进而利用高通量的PCR array代谢组学分析方法在低表达FBXO39的MCF7细胞中筛选受FBXO39调节的代谢相关基因, 最后采用定量PCR实验在低表达FBXO39的Ntera2细胞中验证筛选出来的代谢基因。结果显示, 在MCF7和Ntera2肿瘤细胞中, 6个代谢基因(ALDH9A1、MCT1、DLAT、HMGCS、FASN、GLUL）的表达受FBXO39的正向调控, 表明FBXO39可能通过上调这些基因的表达参与肿瘤细胞的代谢过程。
2016 Vol. 20 (3): 202-207 [
摘要
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208
杨朝霞, 杨霄旭, 李苗苗, 石小亚, 向双林
通过减毒和Red/ET同源重组构建跨界基因沉默菌株
摘 要: “跨界基因沉默”技术是一种全新的、跨原核界与真核界的小分子RNA干扰传递技术。该技术构建了一种大肠杆菌, 在这种大肠杆菌中转录的短发夹RNA（short hairpin RNA, shRNA）能够引发真核细胞内特异性基因的RNA干扰（RNA interference, RNAi）, 所以此大肠杆菌又被称为“跨界基因沉默菌株”。“跨界基因沉默菌株”具有RNA干扰传递功能, 主要得益于“跨界干扰质粒”（trans-kingdom RNAi plasmid, TRIP）。TRIP质粒主要包含inv基因、hly基因以及能够转录shRNA的基因片段。hly基因表达的listeriolysin O蛋白可以帮助细菌逃离真核细胞的吞噬体, 但listeriolysin O蛋白是一种重要的毒力因子, 对宿主细胞具有一定的损害。为了克服这种缺陷, 在hly基因上设计了△PEST和G486D两种减毒突变。同时, 为了使减毒后的TRIP质粒能够在“跨界基因沉默菌株”中稳定存在, 进一步利用Red/ET同源重组将该质粒整合进大肠杆菌的基因组中。实验结果表明, 减毒、整合后的“跨界基因沉默菌株”能更好地发挥RNAi作用。该技术的完善将推进工程菌的研发和利用。
2016 Vol. 20 (3): 208-213 [
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214
李 迪, 吴 萍, 何美凤, 李 伟, 肖调义, 褚武英
qRT-PCR分析鳜鱼内参基因的筛选
摘 要：选择合适的内参基因是提高实时荧光定量PCR分析(quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR)准确性的首要条件。本实验采取鳜鱼8个不同胚胎发育阶段、5个胚后发育时期和8个成鱼组织为研究对象, 应用qRT-PCR技术, 分析了RPL13、RPL19、EF1a、RPL13a、B2M、hprt1和rps29七个内参基因的表达稳定情况。经GeNorm软件分析发现, B2M和RPL13a在鳜鱼成鱼不同组织中表达最稳定; 在胚后不同时期中表达最稳定的是EF1a和RPL13a; EF1a和B2M是在不同胚胎发育阶段中表达最稳定的两个基因。根据内参基因标准化因子的配对差异分析Vn/n+1, 在鳜鱼不同组织和不同发育阶段中, 均使用两个最稳定表达的内参基因即可达到准确校正的目的。因此, 该实验结果为鳜鱼基因表达分析时内参基因的选择提供了参考。
2016 Vol. 20 (3): 214-217 [
摘要
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218
马君燕, 谭海东, 王文霞, 杜昱光, 尹 恒
组氨酸标签位置对重组鹰嘴豆孢克鲁维酵母外切菊粉酶活性的影响
摘 要: 为了研究His6-tag标签位置对鹰嘴豆孢克鲁维酵母CBS4857外切菊粉酶(Kluyveromyces cicerisporus CBS4857 exo-inulinase, KcINU1)酶活性的影响, 实验首先根据Swiss-Model构建的KcINU1三维模型预测了组氨酸标签在KcINU1的位置, 然后将编码His6-tag的基因通过PCR方法分别引入到kcINU1的N端和C端, 并将重组的kcINU1基因克隆到毕赤酵母表达载体pPICZαA, 重组质粒进一步经电转化法整合到毕赤酵母宿主菌X-33中, 最后用甲醇诱导进行分泌表达, 镍柱亲和层析法纯化目的蛋白, DNS法进行外切菊粉酶的活性测定。结果显示, 实验中成功表达了具有活性的、His6-tag标签位置不同的重组蛋白, 并且N-His6-KcINU1糖基化程度比KcINU1-His6-C高, 后者的比活是前者的82.2%, 表明N端携带His6-tag标签不影响蛋白的糖基化修饰, 可以保持较高的酶活。该研究为获得高活性且便于分离纯化的重组KcINU1奠定了基础, 对糖苷水解酶32家族标签位置的选择具有指导意义。
2016 Vol. 20 (3): 218-223 [
摘要
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224
卓奕秀, 柳亦松, 谢红旗, 黄 鹏, 徐 敏, 曾建国
博落回遗传转化体系的初步建立
摘 要：博落回是一种重要且应用广泛的药源植物, 市场前景广阔。现以博落回无菌苗叶片为材料, 通过优化卡那霉素和头孢霉素两种抗生素的浓度, 初步建立了博落回遗传转化体系, 同时利用农杆菌介导法将MtDREB1C基因导入博落回, 获得卡那霉素抗性植株。随机抽取50株转基因植株进行PCR鉴定, 其中3株成功扩增出了目的条带, 经初步统计, 获得博落回阳性苗的概率是6%。实验结果表明植物基因工程技术可作为博落回遗传改良的新途径, 为博落回分子育种奠定基础。
2016 Vol. 20 (3): 224-229 [
摘要
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230
黄科瑞, 宋傲群, 周 琼, 商 辉, 严岳鸿
齿缘刺猎蝽成虫触角和跗节感器的扫描电镜观察
摘 要: 利用扫描电镜观察了齿缘刺猎蝽(Sclomina erinacea Stal)成虫触角及前足跗节上的感受器, 结果表明: 齿缘刺猎蝽触角5节, 由柄节、梗节和3个鞭节构成, 梗节最短; 雌、雄虫前足跗节均为3节。触角上共有3种感器, 分别为毛形感器、刺形感器和锥形感器, 其中, 毛形感器、锥形感器各有两种类型, 刺形感器有3种类型。雌、雄个体间触角感器类型及分布未见明显差异。前足跗节上仅存在刺形感器, 该感器在雄虫前足跗节上的分布较雌虫密集。
2016 Vol. 20 (3): 230-234 [
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235
冯维熙, 曹 新
基于目标基因芯片数据预测lncRNAs调控脑缺血再灌注损伤后的作用效应
摘 要: 长链非编码RNAs（long noncoding RNAs, lncRNAs）在细胞中有重要调控作用。已有研究报道, 脑缺血再灌注损伤可诱导大量lncRNAs表达水平的改变, 然而其具体作用机理未知。现从GEO数据库中下载基因芯片数据, 分析损伤后脑组织中lncRNAs和mRNAs的表达改变。结果显示27条lncRNAs和408条mRNAs表达上调, 9条lncRNAs和31条mRNAs表达下调。同时, 基因本体论和通路富集分析显示差异表达的转录本在免疫和炎症反应、细胞凋亡调控等生物过程及相关通路显著富集。此外, 基于lncRNAs目标预测程序和lncRNAs-mRNAs共调控网络, 对序列数据和表达数据进行综合分析, 发现差异表达lncRNAs参与调控细胞凋亡、免疫和炎症反应, 并推测出lincRNA (chr19:5771425-5848475_F)、lincRNA (chr1:137503023-137625604_R)和lincRNA (chr14:21029450-21049451_F)等lncRNAs潜在的靶基因和调控机制。这些发现提示lncRNAs广泛参与调控脑缺血再灌注损伤, 为缺血性脑卒中损伤机制和治疗方案提供新的研究方向。
2016 Vol. 20 (3): 235-242 [
摘要
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243
郑宝玉, 付 敏, 刘韩青, 丁凤艺
骨质疏松对牙周组织瘦素受体表达的影响
摘 要: 骨质疏松对牙周炎的发生及防治有一定影响, 但其具体作用机制尚不清楚。将SD大鼠卵巢切除构建骨质疏松模型（卵巢切除组, OVX）, 以假手术组（Sham）做对照, 取下颌骨石蜡切片进行免疫组化法染色, 通过显微镜定性观察及Image-Pro Plus (IPP) 软件半定量测量分析两组大鼠牙周组织中瘦素受体（leptin receptor, OB-R）的表达情况, 探究骨质疏松状态对大鼠牙周组织中OB-R表达的影响。研究发现, OB-R在OVX和Sham大鼠牙周组织中均广泛表达, 其中在结合上皮、牙周膜处表达较为明显, 牙槽骨、牙龈结缔组织处表达较弱, 并且OVX大鼠在牙龈、牙槽骨、牙周膜中OB-R表达均较Sham组显著增多（n=10, P<0.05）。结果表明OB-R在骨质疏松牙周组织中表达上调, 可能与骨质疏松后机体代偿性增加OB-R表达有关。
2016 Vol. 20 (3): 243-247 [
摘要
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248
陈嘉盛, 吴 婷, 丘玉昌, 曹 莹, 庞建新
以hURAT1为靶点的排尿酸药物体外细胞筛选模型的建立和应用
摘 要: 人尿酸盐阴离子转运体1(human urate anion transporter 1, hURAT1)是人肾小管重吸收尿酸的主要转运蛋白, 以hURAT1为靶点, 筛选hURAT1抑制剂是近年来降尿酸药物开发的热点, 因此建立hURAT1抑制剂体外细胞筛选模型具有重要的意义与实用价值。本实验首先构建了表达SLC22A12 (hURAT1编码基因) 的慢病毒载体, 感染MDCK细胞后, 通过G418筛选出稳转细胞株(稳转株); 随后采用Western-blot及免疫荧光方法检测目的蛋白的表达, 并通过液闪计数仪检测hURAT1稳转株对[14C]尿酸的摄取作用及hURAT1抑制剂苯溴马隆、丙磺舒对[14C]尿酸摄取的抑制效果。实验结果显示, hURAT1稳转株目的蛋白表达量为对照稳转株的两倍, 并且吸收尿酸的量明显大于对照细胞(P>0.001)。此外, 实验中测得hURAT1稳转株对尿酸吸收的Km值为365.4 μmol/L, 苯溴马隆及丙磺舒对尿酸吸收的IC50分别为0.18 μmol/L和66.82 μmol/L。以上结果表明, 本实验成功构建了稳定表达hURAT1的MDCK细胞株, 并建立了一套hURAT1抑制剂体外准确筛选和评价的方法体系。
2016 Vol. 20 (3): 248-254 [
摘要
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研究进展与综述
255
陈香香, 刘 霞, 白占涛
电压门控钠通道结构与功能的适应性进化
摘 要: 电压门控钠通道是细胞兴奋性的重要分子基础, 在进化演变中远早于神经元。伴随从细菌到脊椎动物的适应性演变, 电压门控钠通道逐渐呈现出复杂的结构、功能和亚型多样性, 且与诸多人类疾病密切相关。明确电压门控钠通道时空演变的适应性进化，解析电压门控钠通道的功能和结构多样性与人类重大疾病发生机制的相关性, 有助于推进电压门控钠通道靶向临床诊疗新策略和新药的发现。
2016 Vol. 20 (3): 255-259 [
摘要
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777
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260
王娟娟, 赵 明, 韩雨威, 吴蒙蒙, 刘瑞振, 沈 超, 祁哲晨
微卫星DNA标记开发技术进展及其在经济植物研究中的应用
摘 要：微卫星分子标记技术被广泛应用于分子生物学研究中, 具有多态性高、重复性好、共显性表达、杂合度高等特点, 在种群遗传多样性、遗传图谱构建等领域发挥不可替代的作用。近年来, 随着新一代高通量测序技术的进一步成熟, 简单重复序列(simple sequence repeat, SSR)标记的开发技术与应用得到了进一步的发展。现主要对基于高通量测序的微卫星分子标记最新开发技术进行介绍, 并从遗传多样性分析、遗传图谱构建、品种鉴定及分子辅助育种等方面, 总结近年来SSR标记技术在经济植物研究中的最新应用, 最后对SSR技术的应用前景进行展望，以期为利用微卫星技术进行经济植物研究提供参考。
2016 Vol. 20 (3): 260-266 [
摘要
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267
冯 时, 梁 张, 赵桂萍, 宝福凯, 柳爱华
恙虫病的免疫机制研究进展
摘 要：恙虫病（scrub typhus）是经恙螨叮咬感染恙虫病东方体（Orientia tsutsugamushi）引起的一种自然疫源性疾病, 在日本、东亚、澳大利亚北部、太平洋地区西部和西南部、印度洋地区广泛分布, 发热、皮疹、焦痂、淋巴结肿大为其主要临床表现。恙虫病东方体主要感染人的内皮细胞, 也可感染树突细胞、巨噬细胞、分叶核白细胞、淋巴细胞, 并在细胞内专性寄生。现对恙虫病东方体致病机理的研究进展进行简要综述, 以期为恙虫病的治疗提供新的思路。
2016 Vol. 20 (3): 267-270 [
摘要
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271
刘艳芬, 陆南佳, 段东辉, 段世伟, 韩丽媛, 麦一峰
表观遗传DNA甲基化与糖尿病研究进展
摘 要：糖尿病是受遗传和环境共同调控的一种代谢性疾病, 发病率高且难以治愈。表观遗传DNA甲基化与糖尿病进程密切相关, 是联通环境因素与基因因素的桥梁, DNA甲基化通过其对基因表达的调节作用影响疾病的发生与发展。肠道微生物菌群是糖尿病研究的新兴热点方向, 能够提供甲基供体等有利于甲基化的便利条件。与肠道微生物菌群及其他相关代谢通路有关的DNA甲基化与糖尿病存在着密切的关系, 其为解释糖尿病的致病机理及寻找有效干预糖尿病的手段提供了新的研究线索和思路。
2016 Vol. 20 (3): 271-277 [
摘要
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662
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278
吕亚丰, 王艳林
EZH2在消化系统肿瘤发生发展中的作用
摘 要：消化系统肿瘤是一类由多因素和多基因异常引发的恶性肿瘤, 相关基因的异常表观遗传调控与其发生和发展密切相关。果蝇zeste基因增强子人类同源物(enhancer of zeste homolog 2, EZH2）是多梳蛋白抑制复合体2 (polycomb repressive complex2, PRC2)的核心亚基, 也是一种重要的负性表观遗传调控蛋白质, 它通过催化组蛋白H3K27位点的甲基化而使肿瘤抑制基因表达沉默。近年来研究发现, EZH2在消化系统肿瘤组织和细胞中高表达, 并与肿瘤的增殖、侵袭和转移显著性正相关, 可独立用作肿瘤患者不良预后指标。对EZH2与消化系统肿瘤相互关系的深入研究, 将对这类肿瘤的治疗提供新的分子靶点和新的途径。
2016 Vol. 20 (3): 278-282 [
摘要
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569
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生命科学研究 - 金宝搏官方188
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