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生命科学研究
2016年 20卷 2期
刊出日期：2016-04-30
研究论文
研究进展与综述
研究论文
95
王姿力, 骆瑜蓉, 罗仲文, 王 静, 肖亚梅
MAPK在不同生殖特性鲫鲤杂交鱼性腺组织中的表达分析
摘 要: 运用Western-blot技术和免疫组织化学来检测丝裂原活化蛋白激酶(mitogen－activated protein kinases, MAPKs)家族成员细胞外调节蛋白激酶（extracellular regulated protein kinase, ERK）和c-Jun氨基末端激酶(c-Jun N-terminal kinase, JNK)在不同生殖特性鲫鲤杂交鱼性腺组织中的表达。研究表明, JNK、ERK在鱼类性腺组织中均有较高量的表达, 但在鱼类卵巢和精巢间、雌核发育二倍体鲫鲤和不同倍性鱼的性腺组织间, JNK或ERK的表达量并不存在明显的差异, 而P-JNK在雌核发育二倍体鲫鲤性腺中的表达量远高于三倍体和四倍体鲫鲤的卵巢组织。此外, JNK和ERK在雌核发育二倍体鲫鲤早期性腺性原细胞中均有阳性表达。其中, JNK在10月龄雌核发育二倍体鲫鲤性腺中的阳性反应强度高于6、8月龄; 而ERK在8月龄和10月龄的性腺中的阳性反应则弱于6月龄。结果表明JNK通路可能对雌核发育二倍体鲫鲤产生不减数配子具有重要调控作用。
2016 Vol. 20 (2): 95-101 [
摘要
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102
王陈美依, 方廖琼, 王祎婷, 王德婧, 王智彪
不同离心力对B16-F10细胞胞外微囊泡尺度、RNA和蛋白成分的影响
摘 要：分析不同离心力对胞外微囊泡尺度、RNA和蛋白成分的影响。在分离纯化小鼠黑色素瘤B16-F10细胞胞外微囊泡过程中, 采用12 000×g、100 000×g两种离心力提纯, 利用纳米颗粒跟踪分析法分析微囊泡的尺度分布, 透射电镜观察微囊泡超微结构, Western-blot鉴定微囊泡蛋白特征, BCA法分析微囊泡内容蛋白含量, 毛细管电泳分析微囊泡RNA的性质和水平。结果显示, 12 000×g组的平均粒径为233±93.5 nm, 100 000×g组的平均粒径为175±74 nm(P<0.05) 12 000×g组微囊泡的蛋白浓度为3.942±0.427 g/L, 100 000×g组微囊泡的蛋白浓度为2.428±0.113 g/L(P<0.01), 并表达exosome特异性蛋白Tsg101蛋白; 12 000×g组微囊泡的RNA总量为22.662 0 mg/L,在258 nt时达到最高, 100 000×g组微囊泡的RNA总量为3.280 1 mg/L, 在283 nt时达到最高(P<0.05)。因此, 微囊泡尺度与离心力相关, 不同尺度微囊泡所含蛋白、RNA不同。
2016 Vol. 20 (2): 102-106 [
摘要
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107
胡吉林, 魏宝阳, 赵 丽, 李超明, 李强国, 王 智
8-羟基喹啉-水杨酸-镧配合物对细菌、酵母及肿瘤细胞抑制效应的初步研究
摘 要：采用杯碟法、微量生物量热法, 研究了8-羟基喹啉-水杨酸-镧配合物（La(C
7
H
5
O
3
)
2
·(C
9
H
6
NO)）对金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus，CICC10384）、枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis，CICC10012）、大肠杆菌（Escherichia coli, sATCC8739）、粟酒酵母（Schizosaccharomyces pombe）及K562和HeLa-60肿瘤细胞的抑制活性。结果表明: La(C
7
H
5
O
3
)
2
·(C
9
H
6
NO)对3种细菌的最小杀菌浓度分别为0.45～0.90 g/L、1.2～1.5 g/L和1.2～1.5 g/L, 而且浓度1.5 g/L以上的稀土配合物对3种细菌的抑制作用存在极显著差异（P＜0.01）, 其中3.6 g/L以上浓度的稀土配合物对3种细菌的抑菌达到了强、中、强的效果; 对S. pombe、K562细胞、HeLa-60细胞也都具有较强的抑制作用, 且IC
50
分别为26.77 mg/L、1.62 mg/L和1.68 mg/L。以上结果说明, La(C
7
H
5
O
3
)
2
·(C
9
H
6
NO)具有较强的抑菌和抗肿瘤效果。
2016 Vol. 20 (2): 107-112 [
摘要
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113
潘润华, 阿斯楞, 张 茂, 利 民, 张梓朗, 廖彩仙
焦磷酸测序法检测OCT4启动子在大鼠骨髓源性肝干细胞分化中的甲基化变化
摘 要: 骨髓间充质干细胞具有分化成为肝细胞的潜能已得到证实, 但其分化的调控机理还不完全清楚。通过检测大鼠骨髓源性肝干细胞(rat bone marrow-derived liver stem cells, RBMLSCs)诱导分化为肝细胞过程中OCT4启动子甲基化的变化, 来探讨启动子甲基化调控细胞分化的机制。RBMLSCs用25 μg/L重组人肝细胞生长因子和0.1 nmol/L地塞米松进行诱导, 在诱导之后不同时间点(0 d, 7 d, 14 d)提取细胞的DNA及RNA。用荧光定量PCR法检测白蛋白(albumin, Alb)和OCT4的 mRNA表达水平, 应用焦磷酸测序法定量检测OCT4基因的启动子中4个CpG位点的甲基化变化。结果表明: 在RBMLSCs分化过程中, Alb mRNA持续增高(P<0.05), 但OCT4 mRNA表达在7 d及14 d明显减少(P<0.005); 同时OCT4启动子上游的CpG 1-2-3甲基化频率显著上升(P<0.001), 但CpG 4甲基化无明显变化。这些结果说明OCT4启动子高甲基化可能导致其mRNA表达减少, RBMLSCs多能性消失, 但CpG 4并不参与这一分化调控过程。
2016 Vol. 20 (2): 113-118 [
摘要
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119
李巍巍, 李 阳, 唐旭清
不同特征描述下H1N1病毒血凝素蛋白序列的比较分析
摘 要：在传统表征蛋白质序列的40维特征向量的基础上, 依据氨基酸的种类与理化性质, 将蛋白质序列40维向量分解为20维、4维和16维3种子特征向量描述。结合33条H1N1流感病毒血凝素（hemagglutinin, HA）蛋白质序列和统计学相关性分析理论, 进行了蛋白质序列两两之间及每条病毒蛋白质序列对应的不同子特征向量之间的相关性分析, 发现病毒蛋白质序列之间存在高度相关性, 且每条病毒蛋白质序列对应的20维子特征向量与其他两种子特征向量之间均不显著相关, 而4维与16维子特征向量之间显著相关。进一步依据不同的特征向量对33条HA蛋白质序列进行分类, 研究发现依据40维特征向量与16维特征向量进行的分类结果高度一致。因此, 在不影响表征病毒序列特性的前提下, 对于已有的表征蛋白质序列的40维特征向量, 可以用16维的特征向量进行代替, 以减少计算复杂度。
2016 Vol. 20 (2): 119-124 [
摘要
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125
王兆松, 赵文铖, 周 蒙, 魏 梅, 董秋萍, 许世磊
人Latexin基因及蛋白质的生物信息学分析
摘 要: Latexin（Lxn）是人的羧肽酶抑制剂, 并有肿瘤抑制因子的作用。利用生物信息学分析Lxn基因的启动子和CpG岛以及Lxn蛋白质的理化性质、结构特点、功能特征后发现, Lxn基因存在两个启动子和CpG岛, 且一个CpG岛与启动子重合; Lxn是全长222个氨基酸, 等电点5.52, 无信号肽、无跨膜结构的亲水不稳定蛋白质; 蛋白质二级结构有4个α螺旋和9个β折叠, 三级预测结构可信度为99.55%,拉曼图表明结构稳定; 与Lxn相互作用的蛋白质主要是羧肽酶, 另外Lxn还参与炎症反应和温度引起的痛觉反应等生物过程; 启动子和氨基酸在灵长类间的同源性极高。对Lxn的表达、结构及功能的预测分析可以为研究Lxn在生命过程中的作用提供重要的信息。
2016 Vol. 20 (2): 125-130 [
摘要
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131
拟南芥酪蛋白激酶1A的原核表达及纯化
摘 要: 拟南芥酪蛋白激酶1A(Arabidopsis casein kinase 1A, AtCK1A)属于丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶家族, 其可能参与了蓝光信号转导并调控植物开花时间。通过对AtCK1A的全长序列进行生物信息学分析得到了其激酶区; 采用RT-PCR的方法从拟南芥cDNA中扩增AtCK1A激酶区, 并构建至pET28a原核表达载体; 将表达载体导入BL21 (DE3)菌株后, 经IPTG诱导表达和Ni亲和层析、阳离子交换层析以及凝胶过滤层析纯化, 得到高纯度的重组蛋白; 最后利用 His 标签抗体对重组蛋白进行了验证。
2016 Vol. 20 (2): 131-134 [
摘要
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135
刘雄军, 吴小平, 欧阳珊
不同水域刀鲚的若干生物生态学特性比较研究
摘 要： 比较分析了不同水域刀鲚的分类地位， 生殖洄游时间、路线和所需外界条件以及其分布现状和资源状况。同时, 于2015年对鄱阳湖、赣江和抚河下游的刀鲚进行了现场调查， 并与1982年采自鄱阳湖的刀鲚标本进行了生物学特性比较。研究发现， 1982年鄱阳湖短颌鲚（定居型刀鲚）体长范围为5.0~30.0 cm， 优势组体长为6~20 cm， 体重范围是0.90~105.08 g； 2015年调查的短颌鲚体长范围为11.6~28.0 cm， 优势组体长为11~20 cm， 体重范围为5.99~81.31 g。1982年鄱阳湖洄游型刀鲚占总尾数的3.86%， 体长范围为15.0~33.0 cm， 体重范围为10.24~151.63 g； 而2015年调查的洄游型刀鲚仅占总尾数的0.97%， 体长范围是25.5~28.0 cm， 体重范围是60.62 ~78.00 g。结果分析表明， 江西上述水域均以短颌鲚为主， 洄游型刀鲚难已形成渔汛。
2016 Vol. 20 (2): 135-139 [
摘要
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140
黄思洋, 陈继尧, 王逸安, 张 君, 李 烨
人参皂苷Rg1对丙二醛抑制小鼠间充质干细胞成骨分化的保护作用
摘 要：为了探讨人参皂苷Rg1 （ginsenoside Rg1, GS-Rg1）对丙二醛（malondialdehyde, MDA）抑制小鼠间充质干细胞（mesenchymal stem cells，MSCs）成骨分化的保护作用及其机制。通过在MSCs成骨诱导培养下, 以不同剂量（10 mg/L、50 mg/L、100 mg/L）GS-Rg1对成骨诱导培养的小鼠骨髓MSCs预处理24 h, 然后用丙二醛处理抑制成骨分化, 采用Von Kossa染色和茜素红(ARS)染色检测钙结节形成, 碱性磷酸酶活性测定碱性磷酸酶（alkaline phosphatase, ALP）活性, 利用Q-RT-PCR和Western-blot检测碱性磷酸酶（ALP）和成骨特异转录因子核心结合因子（Runt-related transcription factor 2, Runx2）的mRNA及蛋白表达情况。结果发现, GS-Rg1能够增加钙结节形成及碱性磷酸酶活性, 同时可以上调ALP和Runx2的mRNA及蛋白表达水平。实验结果初步表明GS-Rg1对MDA羰基应激抑制MSCs的成骨分化具有保护作用。
2016 Vol. 20 (2): 140-144 [
摘要
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558
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1466
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145
朱美霞, 刘晓霞, 康 娅, 刘 聪, 郝旭亮
罗布麻总黄酮通过PI3K/Akt/GSK3
β
抑制H
2
O
2
诱导的EA.hy926凋亡机制研究
摘 要: 心血管疾病严重危害人类健康, 其致病机制主要是氧化应激诱导的内皮细胞凋亡, 保护内皮细胞免受氧化应激损伤是防治心血管疾病的关键。为了探讨罗布麻总黄酮(total flavonoids of Folium Apocyni Veneti， TFF)抑制过氧化氢(hydrogen peroxide, H
2
O
2
)诱导的EA.hy926细胞凋亡的机制, 采用不同浓度TFF处理EA.hy926细胞, 一定浓度的H
2
O
2
造模, 通过MTT法、Hoechst33342/PI荧光双染、流式细胞术检测各组的细胞凋亡情况, 并用Western-blot和荧光定量PCR检测相关蛋白及mRNA的表达水平。研究发现, H
2
O
2
能明显诱导EA.hy926细胞凋亡, 而TFF可降低H
2
O
2
引起的内皮细胞凋亡, 表现为凋亡率降低、线粒体膜电位(mitochondrial membrane potential, MMP)增加、裂解的半胱天冬酶-3, -9（cleaved caspase-3, -9）表达减少、髓细胞白血病因子-1（myeloid cell leukemia-1, Mcl-1)表达增加、磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B/糖原合成酶激酶-3
β
(phosphatidylinositol-3-kinase/protein kinase B/ glycogen synthase kinase-3
β
，PI3K/Akt/GSK3
β
) 通路中Akt、GSK3
β
蛋白的磷酸化水平升高。上述结果表明, TFF主要是通过激活PI3K/Akt/GSK3
β
通路, 调节Mcl-1的表达, 保护MMP, 进而抑制caspase蛋白的剪切活化, 抑制H
2
O
2
诱导的EA.hy926凋亡。
2016 Vol. 20 (2): 145-152 [
摘要
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153
赵文瑾, 顾鹏毅, 刘 洁, 傅炜昕, 赵雨杰
LFNG在白血病BALL-1细胞中的表达状况研究
摘 要：O-岩藻糖肽3-β-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶(Lunatic Fringe, LFNG)与Notch信号作用密切相关, 且LFNG在不同组织细胞中对Notch信号所起的作用不同。为了探讨LFNG在急性B细胞白血病中的表达及对Notch信号的作用, 应用real-time PCR和Western-blot在核酸水平及蛋白质水平上检测了LFNG在人急性B淋巴细胞白血病细胞系BALL-1、人正常B淋巴母细胞系HMy2.CIR及正常B细胞中的表达状况, 并应用siRNA技术分析了LFNG基因沉默后对白血病BALL-1细胞中Notch信号通路的影响。结果显示: 白血病细胞系BALL-1存在LFNG蛋白过度表达, 且LFNG基因沉默后抑制白血病B细胞的Notch信号通路。上述结果提示LFNG在白血病B细胞中的异常表达能促进Notch信号。
2016 Vol. 20 (2): 153-157 [
摘要
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研究进展与综述
158
武雪玲, 常 平, 黄汉昌, 姜招峰
原花青素防治阿尔茨海默病机理研究进展及最新治疗策略
摘 要: 阿尔茨海默病（Alzheimer's disease, AD）是一种进行性发展的致死性神经退行性疾病, 其发病机制非常复杂, 目前临床上还未有能将其彻底治愈的特效药物。近年来的研究发现, 原花青素（procyanidins, PC）具有广泛的生物活性, 尤其是其所具有的抗氧化特性, 对AD的防治显示出一定的积极作用。现结合目前最新AD治疗策略, 对原花青素对AD的预防保护机制进行综述, 以期为未来AD的防治提供新思路。
2016 Vol. 20 (2): 158-161 [
摘要
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565
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162
张 敏, 范久波, 邵金辉, 胡祁生, 于弘钧
DNA双链断裂修复过程中的重要蛋白53BP1
摘 要: DNA双链断裂(double-strand breaks, DSBs)修复对于保证基因组完整性以及维持细胞的平衡稳定性起着关键作用。p53结合蛋白1(p53-binding protein 1, 53BP1)是针对产生的双链断裂损伤做出反应的重要调控因子。目前, 研究人员对于53BP1被招募到受损的染色质上的过程, 以及53BP1在DSBs修复过程中阻止同源重组(homologous recombination, HR)的同时推动非同源末端连接(non-homologous end-joining, NHEJ)的过程, 已经有了新的认识。并且, 近期的研究结果启发科学家们提出了一种新的模型, 即53BP1的招募需要直接识别DSBs特异性的组蛋白密码, 而53BP1发挥作用时的通路选择则与BRCA1蛋白的拮抗作用有关。结合近年来有关53BP1的研究进展, 主要综述了53BP1的结构与功能特点, 其作为调控因子在DSBs修复过程中发挥的作用, 以及53BP1达到有效聚集的方式。
2016 Vol. 20 (2): 162-165 [
摘要
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166
吴志伟, 徐立新, 佟 金1, 陈玉香
多拷贝策略在增强目的基因表达中的应用
摘 要: 作为基因工程领域增强目的基因表达的一种有效手段, 多拷贝策略日益受到分子生物学研究者的青睐。该策略分为3种方式: 表达盒多拷贝、目的基因多拷贝和启动子多拷贝, 目前基因工程领域3种方式均有运用。实现多拷贝的方法有5种, 分别是随机定向串联法、PCR扩增串联法、接头连接法、同尾酶法和化学合成法。多拷贝策略是通过分子生物学手段对基因工程菌目的蛋白质表达进行改良的一种方法, 已有多项研究证明了该策略的可行性, 该策略对基因工程起到了良好的补充作用, 使得转基因产物产量更符合工业生产的需要。
2016 Vol. 20 (2): 166-170 [
摘要
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1410
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171
张 燕, 徐 辰, 严冰浩, 王 越, 刘厚奇
小核仁RNAs及其衍生RNAs的研究进展
摘 要: 小核仁RNAs（small nucleolar RNAs, snoRNAs）是一类发现较早且位于核仁内的小非编码RNAs, 在核糖体RNAs（ribosomal RNAs, rRNAs）、信使RNAs（messenger RNAs, mRNAs）、小核RNAs（small nuclear RNAs，snRNAs）的成熟及修饰中均发挥重要作用。snoRNAs的功能及其作用途径一直以来均是学术界的研究热点。目前, snoRNAs对rRNAs的化学修饰作用已得到广泛认可。另外 , 有研究表明snoRNAs与一些遗传疾病以及肿瘤性疾病的发生发展存在密切关联。近年来研究发现, 部分snoRNAs经切割可生成更小的、有功能的RNAs, 即小核仁RNAs衍生RNAs（snoRNAs derived RNAs, sdRNAs）, 这些sdRNAs中部分具有微小RNAs（microRNAs, miRNAs)的特征, 可发挥类似miRNA的作用, 这一发现极大地拓展了snoRNAs的作用机制方式。结合国内外研究现状, 在总结snoRNAs的结构和基本功能的基础上对sdRNAs与miRNAs之间的相关性进行了综述, 以期为后续的相关研究提供参考。
2016 Vol. 20 (2): 171-177 [
摘要
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602
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178
杨 洁, 闾宏伟
线粒体钙单向转运体和线粒体应激关系的研究进展
摘 要: 钙离子（calcium ion, Ca2+）在线粒体功能障碍及细胞损伤凋亡过程中发挥重要的细胞信号作用。近些年来关于Ca2+通道以及其调控蛋白的研究越来越多, 其中, 线粒体单向转运体(uniporter)复合物的结构组成及其相关蛋白的分布特点成为主要研究热点。作为uniporter复合物中关键的通道蛋白，线粒体钙单向转运蛋白(mitochondrial calcium uniporter, MCU)可顺电化学梯度摄入Ca2+, 将Ca2+从胞质转运到线粒体基质并控制转运速率, 其在胞内Ca2+信号转导、Ca2+稳态、线粒体能量代谢以及细胞凋亡方面具有重要意义。识别调控线粒体内Ca2+信号的MCU及其相关蛋白可深入阐明线粒体应激在相关疾病中的发生发展, 并为进一步的疾病治疗提供理论依据。
2016 Vol. 20 (2): 178-182 [
摘要
] (
763
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183
胥志祥, 刘 君, 马晓冬, 黄 斌, 潘学军
典型内分泌药物用于乳腺癌治疗的研究进展
摘 要: 雌激素与乳腺癌细胞中的雌激素受体（estrogen receptors，ERs）结合后, 通过基因组和非基因组信号途径调节细胞的生长和增殖, 从而参与乳腺癌的发生和发展。内分泌药物作为一类典型的外源雌激素, 它能通过调控不同靶组织中的雌激素水平来抑制细胞的增殖。深入开展内分泌药物研究可为乳腺癌的内分泌治疗提供指导。现综述了典型内分泌药物在乳腺癌治疗中的作用机制, 并对ERs 及其相关信号通路中用于乳腺癌治疗的可能靶点进行了讨论, 以期为潜在的内分泌药物研究提供参考。
2016 Vol. 20 (2): 183-188 [
摘要
] (
528
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生命科学研究 - 金宝搏官方188
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