%0 Journal Article
%A 崔锦锦
%A 季秀玲
%A 林连兵
%A 魏云林
%A 张 琦
%T 一个深黄被孢霉苹果酸脱氢酶基因的克隆与表达
%D 2017
%R 
%J 生命科学研究
%P 208-212
%V 21
%N 3
%X 摘 要: 根据转录组测序结果设计特异性引物, 以深黄被孢霉(Mortierella isabellina) M6-22的cDNA为模板, PCR扩增苹果酸脱氢酶基因MIMDH2, 测序结果显示该序列长1 017 bp, 编码338个氨基酸。序列分析表明该序列与已报道的烟曲霉(Aspergillus fumigates)线粒体苹果酸脱氢酶的相似性最高, 达71.26%, 且含有苹果酸脱氢酶的保守辅酶结合位点、底物结合位点和催化活性位点。将MIMDH2片段连接到表达载体pET32a (+)中, 构建重组表达质粒pET32a-MIMDH2, 并转化至大肠杆菌BL21中进行诱导表达, SDS-PAGE电泳检测结果显示在50 kD左右处有一蛋白质条带, 酶活分析结果显示经镍柱亲和层析纯化的重组蛋白酶活高达271.33 U/mg。以上结果说明所克隆的MIMDH2为一个新的潜在的苹果酸脱氢酶基因, 所编码的蛋白质具有苹果酸脱氢酶的活性。
%U https://smkx.hunnu.edu.cn/CN/abstract/article_2053.shtml