%0 Journal Article
%A 陈嘉盛
%A 吴 婷
%A 丘玉昌
%A 曹 莹
%A 庞建新
%T 以hURAT1为靶点的排尿酸药物体外细胞筛选模型的建立和应用
%D 2016
%R 
%J 生命科学研究
%P 248-254
%V 20
%N 3
%X 摘 要: 人尿酸盐阴离子转运体1(human urate anion transporter 1, hURAT1)是人肾小管重吸收尿酸的主要转运蛋白, 以hURAT1为靶点, 筛选hURAT1抑制剂是近年来降尿酸药物开发的热点, 因此建立hURAT1抑制剂体外细胞筛选模型具有重要的意义与实用价值。本实验首先构建了表达SLC22A12 (hURAT1编码基因) 的慢病毒载体, 感染MDCK细胞后, 通过G418筛选出稳转细胞株(稳转株); 随后采用Western-blot及免疫荧光方法检测目的蛋白的表达, 并通过液闪计数仪检测hURAT1稳转株对[14C]尿酸的摄取作用及hURAT1抑制剂苯溴马隆、丙磺舒对[14C]尿酸摄取的抑制效果。实验结果显示, hURAT1稳转株目的蛋白表达量为对照稳转株的两倍, 并且吸收尿酸的量明显大于对照细胞(P>0.001)。此外, 实验中测得hURAT1稳转株对尿酸吸收的Km值为365.4 μmol/L, 苯溴马隆及丙磺舒对尿酸吸收的IC50分别为0.18 μmol/L和66.82 μmol/L。以上结果表明, 本实验成功构建了稳定表达hURAT1的MDCK细胞株, 并建立了一套hURAT1抑制剂体外准确筛选和评价的方法体系。
%U https://smkx.hunnu.edu.cn/CN/abstract/article_1963.shtml