%0 Journal Article
%A 胡晓星
%A 彭 杰
%A 冯 悦
%A 刘 丽
%A 张阿梅
%A 夏雪山
%T 以主要流行EV71 VP1基因高度保守区为靶点的TaqMan荧光定量PCR检测方法的建立
%D 2016
%R 
%J 生命科学研究
%P 189-195
%V 20
%N 3
%X 摘 要：在我国，肠道病毒71型(enterovirus 71, EV71) C4型是引起手足口病的主要流行基因型。为建立EV71 C4型TaqMan荧光定量PCR检测方法, 在C4型EV71 VP1基因的高保守区, 设计合成引物和TaqMan探针, 将包含此目的区段的基因片段克隆到pcDNA3.1+载体中, 通过体外转录获得标准品, 并以梯度稀释的标准品为模板建立工作曲线, 进而在优化反应条件的基础上建立TaqMan荧光实时定量PCR检测方法。实验中, 所设计引物、探针的高度保守性保证了C4型EV71的高效扩增。经反应条件优化, 引物和探针的最佳工作浓度分别为300 nmol/L和200 nmol/L, 在1×103~1×109 拷贝数检测范围内具有良好的线性关系(R2=1), 灵敏度可达到102 copies/μL。通过对该方法进行检验发现, 批间和组间重复实验的变异系数均小于0.5%, 且该方法对柯萨奇A16 (coxsackievirus A16, CA16)、柯萨奇B1(coxsackievirus B1, CB1)、人轮状病毒(human rotavirus, HRV)、单纯疱疹病毒2型(herpes simplex virus type 2, HSV-2)均无交叉反应, 对6份EV71阳性样本检出率为100%。以上数据表明, 文中建立的TaqMan荧光定量PCR方法可为我国主要流行C4型EV71感染的快速诊断及疾病监控提供有效途径。
%U https://smkx.hunnu.edu.cn/CN/abstract/article_1953.shtml